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將新鮮組織標(biāo)本制成薄而連續(xù)的石蠟切片，為HE染色、免疫組化等后續(xù)病理檢測(cè)提供優(yōu)質(zhì)樣本，便于顯微鏡下觀察組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及病理變化。
1. 樣本：新鮮動(dòng)物組織或人體穿刺/手術(shù)標(biāo)本；2. 試劑：4%多聚甲醛固定液、梯度酒精（70%、80%、90%、95%、無(wú)水乙醇）、二甲苯、石蠟（熔點(diǎn)56-58℃）、蘇木素-伊紅染液（備用）；3. 儀器：病理組織脫水機(jī)、包埋機(jī)、切片機(jī)、攤片機(jī)、烤片機(jī)、顯微鏡、鑷子、剪刀、組織包埋盒、載玻片、蓋玻片。
組織固定：取新鮮組織，用剪刀修剪成1-2cm×1-2cm×0.3cm大?。ū苊膺^(guò)厚導(dǎo)致固定不充分），迅速放入4%多聚甲醛固定液中，固定時(shí)間4-24小時(shí)（組織越大，固定時(shí)間越長(zhǎng)，一般不超過(guò)24小時(shí)，防止組織過(guò)度硬化）。固定的目的是保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，阻止細(xì)胞自溶和腐敗。
組織脫水：將固定好的組織取出，用流水沖洗30分鐘，去除殘留固定液，然后依次放入梯度酒精中脫水，每步停留1-2小時(shí)（脫水需徹底，否則影響透明和包埋）：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精（2次，每次1小時(shí)）→無(wú)水乙醇（2次，每次1小時(shí)）。脫水原理是逐步去除組織內(nèi)水分，為后續(xù)透明劑和石蠟滲透做準(zhǔn)備。
組織透明：將脫水后的組織放入二甲苯中透明，分2次進(jìn)行，每次15-30分鐘，直至組織完全透明（呈半透明狀，無(wú)白色渾濁）。透明的作用是使石蠟?zāi)茼樌麧B透到組織內(nèi)部，二甲苯可溶解乙醇，同時(shí)與石蠟互溶。
組織包埋：提前將石蠟放入包埋機(jī)中融化（溫度設(shè)置56-58℃，與石蠟熔點(diǎn)匹配），將透明后的組織放入融化的石蠟中浸泡，3次，每次1小時(shí)，完成石蠟滲透。然后將組織放入包埋盒，調(diào)整組織位置（切面朝下，便于后續(xù)切片），倒入融化的石蠟，待石蠟冷卻凝固后，形成石蠟塊，取出備用。
切片：將石蠟塊固定在切片機(jī)上，調(diào)整切片厚度為4-5μm，轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)制作連續(xù)切片。用毛筆將切片輕輕取下，放入40-45℃的攤片機(jī)中，使切片展平（避免褶皺），然后用載玻片將展平的切片撈起，置于烤片機(jī)上（60℃）烘烤2-4小時(shí)，使切片牢固粘附在載玻片上，同時(shí)去除殘留二甲苯和水分。
備用：烤片完成后，取出載玻片，冷卻至室溫，可直接進(jìn)行染色，或置于干燥處保存，避免受潮。
1. 固定液需足量，組織與固定液體積比不低于1:10，且組織修剪厚度不超過(guò)0.3cm，確保固定均勻透徹，避免中心部位細(xì)胞自溶；
2. 脫水、透明、石蠟滲透需嚴(yán)格遵循梯度流程，不可跳過(guò)或縮短某一步驟，否則易導(dǎo)致組織碎裂、透明不全，最終影響切片完整性；
3. 包埋時(shí)需調(diào)整組織切面朝下，石蠟溫度穩(wěn)定在熔點(diǎn)范圍，避免溫度過(guò)高損傷組織、過(guò)低導(dǎo)致滲透不足；切片及撈片過(guò)程動(dòng)作輕柔，防止切片褶皺、斷裂，烤片后需置于干燥環(huán)境保存，避免受潮影響后續(xù)染色。
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