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對于凋亡細(xì)胞的檢測，皺縮、變形、空泡化，抑或裂解為凋亡小體，都逃不過光學(xué)倒置顯微鏡的火眼金睛。
吉姆薩染色、瑞氏染色等兩位“助攻”齊上陣，將凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀等典型形態(tài)一展無遺，以確保沒有漏網(wǎng)之魚。
吉姆薩染色實驗
吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)。對細(xì)胞著色后便于觀察，方便對凋亡細(xì)胞做出檢測判斷。
PH對細(xì)胞染色有一些影響。細(xì)胞里各種成分均不蛋白質(zhì)，因為蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境里正電荷增多，易和伊紅結(jié)合，染色為偏紅；在偏堿性環(huán)境里負(fù)電荷增多，易和美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。
實驗步驟
1.將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。
（1）1個盤：pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。
（2）3個盤：水。
（3）脫水系列溶液：
①3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。
②2個盤：盛有100%乙醇。
③3個盤：盛有二甲苯。
2.在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s（依染色時間決定染色的強弱），將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。
3.連續(xù)用乙醇脫水系列溶液處理，每盤中浸泡2 min，將玻片移至二甲苯盤中，毎次浸泡2 min，共3次。
4.在通風(fēng)櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所處位置），左手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上（在加壓片固定介質(zhì)和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會造成人為假象）。
5.用3MM 濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余固片介質(zhì)/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。
6.將玻片平放于一硬紙盒盤上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。
7.以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳，染料及固片介質(zhì)。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒，必要時，載玻片上再注明標(biāo)簽。
8.顯微鏡觀察玻片，觀察時可依信號強弱，調(diào)節(jié)光亮。
2026-02-21
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